Live -celbeeldvorming vereist microscopendie fototoxiciteit minimaliseren, de levensvatbaarheid van cellen behouden en beeldvorming met hoge resolutie in de loop van de tijd bieden. Veel voorkomende keuzes zijn:
1. Omgekeerde fluorescentiemicroscopen:
Widefield Microscopen: uitgerust met omgevingscontroles (temperatuur, co₂, vochtigheid) en gevoelige camera's (bijv. SCMO's). Vaak gecombineerd met fasecontrast of DIC (differentiaal interferentiecontrast) voor labelvrije beeldvorming.
Spinning Disk Confocal: vermindert fotobleken met sneller scannen in vergelijking met traditionele laserscanning confocaal. Ideaal voor dynamische processen.
2. Light Sheet Fluorescention Microscopy (LSFM):
Illumineert alleen het focale vlak, waardoor de blootstelling aan het licht drastisch wordt verminderd en langdurige beeldvorming mogelijk maakt (bijvoorbeeld uren tot dagen).
3. Microscopie van twee fotonen:
Gebruikt bijna-infrarood licht voor diepere weefselpenetratie en verminderde fototoxiciteit, geschikt voor dikke monsters zoals 3D-culturen.
4. TIRF (totale interne reflectiefluorescentie):
Visualiseert gebeurtenissen bij decelmembraan(bijv. Blaasjeshandel) door een dunne (~ 100 nm) optische sectie af te stellen.
5. Super-resolutiemicroscopen (bijv. Sted, SIM):
Een hogere resolutie bereiken, maar vereisen zorgvuldige optimalisatie om lichtblootstelling en celgezondheid in evenwicht te brengen.
6. Live-cel-geoptimaliseerde systemen:
Neem milieukamers, adaptieve optica en detectoren met weinig licht (bijv. EM-CCD-camera's) op.
Belangrijkste kenmerken voor live beeldvorming:
- Omgevingscontrole: handhaaft temperatuur, co₂ en vochtigheid.
- Snelle acquisitie: minimaliseert beweging vervaging voor dynamische processen.
- Lage fototoxiciteit: filters, LED -lichtbronnen of lichtplaatverlichting verminderen schade.
Kies op basis van resolutiebehoeften, beeldvormingsduur en monstergevoeligheid.
